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吉林省中药材和饮片标准研究制定技术要求

2017-03-01| 来源: 吉林省食品药品标准服务平台|浏览次数:19

吉林省中药材和饮片标准研究制定技术要求

(试行)

 

编制好《吉林省中药材和饮片标准》,体现中药材和饮片质量标准的制定特点,保证中药材和饮片质量标准所设定的方法与指标基本能控制其质量,规范标准起草工作,特制定本技术要求。本要求包括五个部分。

一、实验室条件及人员的要求

承担《吉林省中药材和饮片标准》起草任务的单位,应具有通过计量认证或能满足起草任务要求的实验室,具有相应技术人员,具备中药研究、检验常用仪器和设备,能确保实验用试剂、试药及对照物质符合规定。

承担质量标准研究的人员应具有三年以上中药检验、研究工作经历,并有一定的标准研究和起草经验。

二、供起草用样品及对照物质的要求

收集样品前应认真考证该品种的来源、产地、资源情况(写入起草说明)。收集的样品应具有代表性,对于容易区分的多来源品种,每种来源都要收集3~5批样品,单来源的品种至少应收集10批以上。避免由同一供货渠道收集实际为一批样品的“多批样品”。同时还应注意多收集该品种的易混伪品供比较研究用。产地加工应遵循当地传统方法。

收集的药材样品应标明产地(如有可能标明野生或家种)、收集地、收集时间等。新增药材品种要求附带2份腊叶标本,腊叶标本须经相关专家签名鉴定。

收集到的样品应由专家予以鉴定,药材鉴定时要注意品种的变异情况,每份样品均应标明鉴定人(并写入起草说明中)。样品量除满足起草研究、留样观察外,还应有不少于3倍检验量的样品供复核用。

质量标准制定应使用法定部门认可的对照物质(包括对照品、对照提取物和对照药材)。若使用的对照物质是自行研制的,应按照相关的要求申报相应的鉴定研究资料和对照物质。

三、编写要求

标准正文应按“《吉林省中药材和饮片标准》正文编写细则”的要求编写;标准起草说明应按“《吉林省中药材和饮片标准》起草说明编写细则”的要求编写。

实验记录书写应真实、完整、清晰保持原始性并具有可追溯性,应按要求建档永久保存。

四、检测方法和检测指标的制定

要提高中药材和饮片检测方法的专属性,建立科学合理的控制指标。

要注重中药安全性检测方法和指标的建立和完善,加强对可能存在的重金属及有害元素、残留农药、残留二氧化硫、黄曲霉毒素等安全隐患进行检测。

实验中应注重绿色环保要求,尽量采用毒害小、污染少的试剂、试药,避免使用苯等毒性大的溶剂;并尽量采用现行版《中国药典》四部通则中已收载的试剂与试液。

五、具体项目内容的技术要求

中药材质量标准内容包括名称、来源、性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定、贮藏等。

饮片质量标准内容包括名称、来源、炮制、性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定、性味与归经、功能与主治、用法与用量、注意、贮藏等。

有关项目内容的技术要求如下:

 (一) 名称 

中药材名称包括中文名、汉语拼音及拉丁名,按《中药及天然药物命名原则》有关规定命名。加工方法仅为净制、切制的,饮片名称同药材,采用炮炙加工方法的,名称中取炙法与药材名称相呼应,如炙黄芪、炒神曲等。起草单位应核对药材中文名与拉丁名,并保证拉丁学名为现通用学名。

 (二)来源 

植(动)物药包括原植(动)物的科名、植(动)物的中文名、拉丁学名、药用部位、采收季节、产地加工和药材传统名称;矿物药包括该矿物的类、族、矿石名或岩石名、主要成分及产地加工。

基源植物的科名、拉丁学名的主要参照依据为《Flora of China》、《中国植物志》及《中国高等植物》,如该植物不在上述文献中收载,可适当参照各地方植物志、《新编中药志》、《常用中药材品种整理和质量研究》等资料;基源动物的科名、拉丁学名的主要参照依据为《中国动物志》、《汉拉英动物药名称》及相关的文献资料。

单列炮制品的来源简化为“本品为××的炮制加工品”,收载相应的炮制工艺。

1.中药材应进行原植物的鉴定,并提供腊叶标本和药材给复核单位,同时在起草说明中提供本草考证、药用资源调查、基源鉴定以及临床应用情况等有关研究资料。

2.采收时间和方法

    采收时间与药材质量有密切关系,故对采收时间应进行考察,并在起草说明中列入考察资料。

采收时间如必须控制在某生长阶段的,则应明确规定,如“花盛开时采收”、“枝叶茂盛时采收”;有的品种对采收时间段虽不十分敏感,但某生长阶段的采收质量相对较好,则可规定为“全年均可采收,以枝叶茂盛时采收为佳”等。

凡全年均可采收,对药材质量无影响者,规定为“全年均可采收”。

药材的性状与采收时间有密切的关系,故用于药材性状描述的样品应为在该时间段内采收的样品。

(三)性状

性状主要指药材、饮片的形状、大小、表面(色泽、特征)、质地、断面、气味等特征。按药材、饮片的实际形态描述,描述要抓主要特征,文字要简练,用语要准确。

性状的观察方法主要是运用感官来鉴别,如用眼看(较细小的可借助于扩大镜或解剖镜)、手摸、鼻闻、口尝等方法。

多植(动)物来源的药材,其性状无明显区别者,可合并描述;有明显区别者,应分别描述。

药材形状有明显区别,但植(动)物来源相互交叉则按传统习惯,以药材的形状分别描述。

根、根茎、藤茎、大果实、皮类等适合观察断面特征的药材,应尽量多描述断面特征,以便进行破碎药材或饮片的性状鉴别。

(四)鉴别

鉴别系指对药材、饮片的真伪进行判定,包括经验鉴别、显微鉴别、理化鉴别。所建立的鉴别项目应尽可能区别同类相关品种或可能存在的易混淆品种。对无专属性、重现性差的项目,尽量不予收载。

1.经验鉴别

是用传统的实践经验,对药材、饮片的某些特征,采用直观方法进行鉴别真伪的方法。

2.显微鉴别

系指用显微镜对药材、饮片的切片、粉末、解离组织或表面制片的显微特征进行鉴别的一种方法。

(1)凡有下列情况的药材、饮片,应尽量规定显微鉴别:即组织构造特殊或有明显特征可以区别类似品或伪品的;外形相似或破碎不易识别的;或某些常以粉末入药的毒性或贵重药材、饮片。

(2)鉴别时选择具有代表性的样品,根据鉴定的对象与目的,参照现行版(《中国药典》四部通则2001)选用不同的试剂制备组织、表面或粉末显微切片、观察。对植物类中药,如根、根茎、藤茎、皮、叶等类,一般制作横切片观察,必要时制作纵切片;果实、种子类多制作横切片或纵切片观察;木类药材制作横切片、径向纵切片及切向纵切片三个面观察。观察粉末类药材或药材粉末特征时,制作粉末装片。

(3)显微粉末鉴别,通常观察并收载药材细粉(过5号筛)的特征,以便与成方制剂粉末药材通常以细粉投料的生产实际相一致。但观察药材粉末,尤其是腺毛、非腺毛、纤维、导管等细长特征时,也可取过4号筛的药材粉末观察。

(4)对于多来源药材或易混淆品应注意考察显微特征是否一致,在组织构造和粉末特征研究的基础上,确定显微特征的相同和不同点,并说明其专属性。

(5) 显微鉴别书写时可省略制片过程,简写成“取本品,置显微镜下观察:”,之后描述各药材、饮片的显微特征。力求准确规范。起草说明中还应附上清晰的显微特征照片及图注和放大倍数

3.理化鉴别

包括物理、化学、光谱、色谱等方法。根据药材、饮片的理化性质而规定。药材因成分复杂,干扰物质多,一般理化鉴别、光谱鉴别方法很难符合专属性的要求,因此,除矿物药材外,原则上不予采用。

理化试验所用试液,应尽量采用药典通则8000中已收载的,药典未收载的用括号写明配制方法或在标准正文后加注。

(1)一般理化鉴别

应在明确鉴别成分或成分类别时,选择专属性强及反应明显的显色反应、沉淀反应、荧光现象等理化鉴别。选择显色反应、沉淀反应,一般选择1~2项,供试液应经初步分离提取,以避免出现假阳性的结果。

选择荧光特征鉴别时,可采用药材新的切面(或粉末),或药材、饮片提取液,或将溶液滴在滤纸上,置紫外光灯下观察,标明使用波长,记录荧光颜色。应考察药材、饮片放置不同时间引起的荧光变化。

凡《中国药典》四部通则0301“一般鉴别试验”有规定的鉴别反应,在正文中应明确使用的具体方法,同时说明供试品溶液制备的方法。

(2)光谱鉴别

矿物药的某些光谱特征,可作为鉴别的依据。

其它药材、饮片当无法建立专属性鉴别时,如含有的化学成分在紫外或可见光区有特征吸收光谱,也可作为鉴别的依据。鉴别特征可采用测定最大吸收波长,如有2~3个特定吸收波长时,可测定各波长吸收度的比值。

(3)色谱鉴别

色谱鉴别是利用薄层色谱、气相色谱或液相色谱等对中药材、饮片进行真伪鉴别的方法。薄层色谱法具有快速、简便、直观、经济等优点,原则上首选薄层色谱法。气相色谱与高效液相色谱鉴别一般用于薄层色谱分离度差、难以建立有效鉴别方法的样品。

①薄层色谱法  应对不同基原、不同产地、不同加工炮制方法的药材和饮片进行考察,重点研究多来源药材、饮片的色谱行为是否一致,确定其异同点。如果具有明显差异,应明确所使用对照药材的植物来源,并建立相应标准。

在建立方法时,应采用以对照品和对照药材或对照提取物同时进行对照。当对照品不易获得时,采用以对照药材为对照;某些鉴别被测物为单一成分的,可以只采用对照品进行对照;不宜采用Rf值表述色谱行为。

供试品溶液的制备应尽可能除去干扰色谱的杂质,同时方法要尽量简便,应视被测物的特性来选择适宜的溶剂和方法进行提取、分离。

为了使图谱清晰,斑点明显,分离度与重现性符合要求,应根据被测物的特性选择合适的固定相、展开剂及显色方法等色谱条件。确定供试品取样量、提取和纯化方法、点样量等条件;选择合适的对照物质,确定对照物质用量、浓度、溶剂、点样量等。

由于实验时的温度、湿度常会影响薄层色谱结果,因此,建立方法时应对上述因素进行考察。如有必要,应在标准正文中注明温、湿度要求。

除需要特殊处理和化学改性,一般应采用预制的商品薄层板。不同品牌的薄层板或自制薄层板的薄层色谱结果有一定的差异,因此应对其进行考察选择适宜的薄层板。

②液相色谱

液相色谱法可用于药材和饮片的特征成分或特征图谱鉴别。主要用于薄层色谱难以实现有效鉴别的样品分析。

应根据待测样品的性质,选用适宜的色谱柱、流动相(尽量避免使用缓冲液)、检测器等。进行系统适用性实验,考察分离度、对称因子、理论板数等参数,选择最佳色谱条件。

供试品溶液的制备应根据待测样品的特性选择适宜的方法,包括供试品取样量,提取和纯化方法、稀释度、进样量;对照物质用量、浓度、溶剂、进样量等。

③气相色谱

适用于含挥发性成分药材、饮片的鉴别。

应根据待测样品的性质,选用适宜的色谱柱、填料、固定相、涂布浓度、检测器等。进行系统适用性实验,确定进样口及检测器温度、柱温,考察分离度、对称因子、理论板数等参数,选择最佳色谱条件。

供试品溶液的制备应根据待测样品的特性选择适宜的方法,包括供试品取样量,提取和纯化方法、稀释度、进样量;对照物质用量、浓度、溶剂、进样量等。

(五)检查

检查系指对药材、饮片的含水量、纯净程度、有害或有毒物质的限量或含量等进行检查。应根据药材、饮片的具体情况规定检查项目,制订能真实反映其质量的指标和限度,以确保安全与有效。

制定各品种质量标准时,应考察《中国药典》四部通则收载的检查方法项下每种方法对所测品种的适用性,一般应明确规定使用第几法并说明使用该方法的理由。

制定检查限度,应按要求收集足够量有代表性的样品,根据实测数据制定限度。

如产地加工中易带进非药用部位的应规定杂质检查;易夹带泥沙的须做酸不溶性灰分检查;一般均应有水分、灰分检查;栽培药材,还应提供重金属及有害元素、农药残留量等研究资料,必要时在正文中做相应规定;易霉变的品种应增加黄曲霉毒素检查;某些品种还需进行二氧化硫残留量检查。

凡《中国药典》四部通则中同一检查项下收载多个方法的,应在标准中明确具体的试验方法,同时描述供试品溶液制备的方法。

在制定限度时注意应使用代表性的样品来积累数据,订出切实可行的限度。常见的检查项目如下:

1.杂质  系指与该品种来源不相符合的物质,或混入的同一来源,但其性状或部位与规定不符的物质,或混入的砂石、泥块等其它物质。产地加工中易带进非药用部位的应规定杂质检查。根据药材的具体情况考虑是否收载,测定方法照《中国药典》四部通则2301“杂质检查法”。如采用特殊方法进行杂质检查,应给出具体方法,如麝香采用显微镜检法、蒲黄采用筛分法等。

2.水分  水分过高或易吸湿容易引起发霉变质的中药材、饮片,一般应规定水分检查。制订水分限度应考虑南北气候、温度、湿度差异较大以及药材和饮片包装、贮运的实际情况。方法照《中国药典》四部通则0832“水分测定法”。应标明第×法。

3.灰分  灰分包括总灰分、酸不溶性灰分,根据药材、饮片的具体情况,可规定其中一项或二项。凡易夹杂泥沙、炮制时也不易除去的药材和饮片或生理灰分高的药材和饮片(总灰分测定值大于10%,酸不溶性灰分测定值超过2%),除规定总灰分外还应规定酸不溶性灰分。

4.重金属及有害元素

均应进行比较研究,根据研究结果确定在检查项下是否规定重金属及有害元素的检查。测定方法照《中国药典》四部通则“砷、汞、铅、镉、铜测定法”。

   5.膨胀度  膨胀度是某些药材和饮片膨胀性质的指标。主要用于含粘液质、胶质和半纤维素类的药材和饮片。测定方法照《中国药典》通则2101“膨胀度测定法”。

6. 酸败度  酸败是指油脂或含油脂的种子类药材和饮片,在贮藏过程中,与空气、光线接触,发生复杂的化学变化,产生特异的刺激臭味(俗称哈喇味),即产生低分子化合物醛类、酮类和游离脂肪酸,从而影响了药材的感观和内在质量。通过酸值、羰基值或过氧化值的测定,以控制含油脂的种子类药材和饮片的酸败程度。测定方法照《中国药典》四部通则2303“酸败度测定法”。

7.农药残留量 系指施用的农药残存在生物体和环境中的农药原型、有毒代谢物,降解产物和杂质最终在药材和饮片中残留的量。对中药调剂和制剂中使用较多、用药时间较长、药食两用、儿童用药及进出口较多的药材和饮片,应根据农药施用的实际情况和各类农药的理化性质、残留期长短、降解期产物及其毒性等情况(重点针对常用、禁用、剧毒及土壤及水环境中难于降解且易残留农药品种),建立合适的检测项目。测定方法照《中国药典》四部通则2341“农药残留量测定法”。

   农药残留量限度的规定可根据中国及相关组织规定的农药每日最大摄取量、中国人的身体情况和中药材常用服用剂量制订各种农药在不同药材和饮片中的残留量限度要求。

8.其他检查  系指除《中国药典》四部通则规定的各项检查以外,其他还应视情况规定具有针对性的检查,如伪品、混淆品、色度、吸水性、发芽率等和某些含毒性成分的药材和饮片的限量检查。

(六)浸出物

浸出物系指根据药材、饮片中主要成分的理化性质,采用水、乙醇或其他适宜溶剂进行提取测定,根据采用溶剂不同分为:水溶性浸出物、醇溶性浸出物及挥发性醚浸出物等。适植、动物类药材和饮片原则上应建立浸出物测定。对于无法建立含量测定,或虽已建立含量测定、但所测定成分与功效相关性差或含量低的药材和饮片,必须建立浸出物测定,以便更好地控制质量。测定方法照《中国药典》四部通则2201“浸出物测定法”测定。

(七)含量测定

系指用化学、物理或生物的方法,对药材和饮片含有的有效成分、指标成分或类别成分的含量进行测定。

1.测定成分的选定

(1)应首选有效或活性成分,如药材、饮片含有多种活性成分,应尽可能选择与中医用药功能与主治相关成分。

(2)对于主要有效成分或指标性成分明确的中药材和饮片,应尽可能建立多成分含量测定,可以分别制定含量限度或以总量计制定含量限度。

(3)对于尚无法建立有效成分含量测定,或虽已建立含量测定、但所测定成分与功效相关性差或含量低的药材和饮片,而其有效成分类别又清楚的,可进行有效类别成分的测定,如总黄酮、总生物碱、总皂苷、总鞣质等的测定;含挥发油成分的,可测定挥发油含量。

(4)某些品种,除检测单一专属性成分外,还可测定其他类别成分,如五倍子测定没食子酸及鞣质;姜黄测定姜黄素及挥发油含量等。

(5) 应优先选择测定药材、饮片所含的原形成分。

(6) 不宜采用无专属性的指标成分和微量成分(含量低于万分之二的成分)定量。

2.含量测定方法

常用的如经典分析方法(容量法、重量法)、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、薄层色谱扫描法、气相色谱法、其他理化检测方法以及生物测定法等。根据药材和饮片所含主要成分的理化性质合理选择测定方法,优先选择专属性强的色谱法。

3.供试品溶液制备方法选择

(1)提取条件的确定,应对不同溶剂、不同提取方式、不同时间及不同温度等条件进行比较,确定最佳条件,并提供研究数据。

(2)(分离纯化条件的确定,根据被测成分的性质,对样品溶液可进行适当的分离纯化以排除干扰物质,如采用液-液萃取及聚酰胺、氧化铝、大孔吸附树脂等色谱纯化方法,并提供方法选择的依据及相应的研究数据。

4.含量测定方法的研究内容要求

选用的分析方法应符合《中国药典》2015年版四部通则9101“药品质量标准分析方法验证指导原则”的要求。

(1)容量法

主要用于含矿物类药材和饮片的含量测定,常用中和法、碘量法、银量法、络合量法等。 应注意对样品必要的处理、破坏,取样量应满足精度要求,消耗滴定液控制在10~20ml;确定滴定液、滴定度及指示剂等,指示剂对终点变色应敏锐、易观察、无其他颜色干扰。

(2)重量法 

应确定供试品用量、提取溶剂与方法、纯化及干燥等条件,必要时提供换算因子(四位有效数字)。

(3)氮测定法

主要用于含较多蛋白质或氨基酸中药的含量测定。根据品种情况确定使用常量法或半微量法,照《中国药典》2015年版四部通则0704“氮测定法”测定并规定限度。

(4)紫外-可见分光光度法

用于在特定波长处对光有吸收或通过加入一定的显色剂后有吸收的单一成分或类别成分的含量测定,常用方法有对照品比较法和比色法。中药成分复杂、干扰因素不易排除,成分含量变化幅度大,因此紫外-可见分光光度法中的吸收系数法一般不宜采用。

建立方法时应确定供试品溶液及对照品溶液的制备方法,选择最佳的测定波长,配制供试品溶液时,提取、转移、稀释次数应尽量少;取样量应适宜,一般吸光度应在0.3-0.7之间。

(5)薄层色谱扫描法

薄层色谱扫描法用于中药含量测定时,应选择在一定条件下能产生荧光的化学成分,需要显色后进行扫描测定的成分一般不提倡使用该方法。

应采用预制的商品薄层板;扫描方式一般选用反射方式,采用吸收法或荧光法;扫描方法可采用单波长扫描或双波长扫描。

①应优化选择供试品提取与纯化方法;对照品取用量应与供试品溶液中的被测成分的含量相匹配,供试品取样量应能使被测成分的含量在对照品高低浓度的范围内,并注意避免点样量超载。

②应优化选择薄层色谱条件,如薄层板型号(注意对不同厂家及不同批号的薄层板进行分离效果比较)、薄层板的预处理、展开溶剂、展开条件、检视条件、扫描条件等。

③要关注实验环境(例如,温度、湿度)对结果的影响,对温、湿度敏感的品种应将温、湿度要求列入标准正文。

④计算方法一般采用线性回归二点法或多点法校正多项式回归计算。

(6)高效液相色谱法

高效液相色谱法具有分离性能高、分析速度快、灵敏、操作简便等特点,已成为中药含量测定的首选方法。测定方法有内标法和外标法,一般首选外标法。流动相组成可采用固定比例(等梯度洗脱)或按程序改变比例(梯度洗脱)。常用的检测器为紫外检测器(UV)、荧光检测器、示差折光检测器、蒸法光散射检测器(ELSD)、质谱检测器等。

建立方法时,应以二极管阵列检测或质谱检测对所测定的样品峰进行单一性验证,并将验证结果列入起草说明中。

①根据被测成分的性质选用适宜的色谱柱,一般首选C18柱,注意色谱柱的性能、适用范围、适宜的pH值范围等。

②优化色谱条件(色谱柱、流动相组成及比例,尽量避免使用缓冲溶液、洗脱程序、检测波长)确定系统适用性试验参数(理论板数、分离度等)。

③选定供试品取用量、提取及纯化方法(用超声处理时,应规定功率、频率、处理时间),稀释体积、定容体积等;选定对照品溶液配制用溶媒、配制浓度、配制方法等。

④利用蒸发光散射检测器(ELSD)检测时,应根据供试品中被测成分的峰面积积分值或响应值进行数学转换后进行计算。

(7)气相色谱法

气相色谱法用于含挥发性成分的含量测定,测定方法有内标法、外标法,中药含量测定首选外标法。检测器有火焰离子化检测器(FID)、热导检测器(TCD)、质谱检测器(MS)等,除另有有规定,一般选用氢火焰离子化检测器。

建立方法时可选择填充柱或毛细管柱,一般中药测定宜选用毛细管柱;选用毛细管柱时应考察确定毛细管柱种类、柱长、内径、膜厚度等;选用填充柱应考察确定固定相种类及涂布浓度。

①选择进样口温度、柱温(若为程序升温应确定初始温度、程序升温速度、达到温度、保持时间等)、检测器温度、分流比、理论板数等有关参数。

②采用内标法时,应选定适宜的内标物质及校正因子的测定方法,内标物质的峰应能与样品中的被测成分及杂质峰达到较好的分离。

③采用外标法定量时,为保证进样误差符合规定,宜采用自动进样,提高进样重复性。

④选定供试品溶液的制备方法(用超声处理时,应规定功率、频率、处理时间),稀释体积、进样体积等。

(8)电感耦合等离子体质谱法

电感耦合等离子体质谱法灵敏度高,可用于多种元素的同时测定,分析效率高,是目前国际公认的最先进的元素分析方法。测定模式有一般模式和氦气碰撞反应模式及氢气碰撞反应模式。定量方法有工作曲线法、标准加入法,一般首选工作曲线法。

①建立方法时应根据元素的特性选择测定模式(例如测定砷应选用氢气或氦气碰撞反应模式);选择合适的测量质量数。

②测定前应进行对仪器进行灵敏度和干扰物调谐,达到要求后方可进行测定。

③考察工作曲线的线性浓度范围,相关系数不得小于0.9990。

④实验用器皿以免被污染,均应事先洗干净并用10%硝酸浸泡过夜后再用去离子水冲洗干净备用。

⑤实验用试剂应选择优级纯或更纯级别,水为去离子水(电阻率应大于18MΩ)

⑥供试品溶液的制备方法取样量、消化试剂、消化方法(推荐使用微波消解方法,该方法不易污染,样品消解过程元素不易损失,亦可采用干法消解或湿法消解,但应对消解方法和温度进行方法考察)等。上机溶液应澄清,酸度一般不大于10%。供试品溶液中元素的浓度应在工作曲线的浓度范围之内,否则应调整取样量或稀释倍数,并同法制备空白溶液作为试样空白。

⑦制备并测定空白样品溶液,考察各待测元素的检测限。

⑧标准物质测定值应为参考值的70%~130%;加标回收试验结果应为60%~140%。

(9)原子吸收分光光度法

原子吸收分光光度法用于测定成原子态的金属元素和部分非金属元素,按照原子化方式的不同常见火焰原子吸收、石墨炉原子吸收、氢化物原子吸收和冷蒸汽发生原子吸收4种。

应针对样品中元素含量高低和所测元素的特性选择合适的原子化方法:火焰原子吸收法一般测定元素的含量为ppm级,少数元素可达ppb级;石墨炉原子吸收法主要可用于铅、镉等元素的测定其检测元素的含量一般为ppb级;氢化物原子吸收法多用于测定砷、硒、锡、锑、汞的测定,可测定溶液浓度为ppb级;冷蒸汽发生原子吸收也用于汞的测定,其测定浓度可达ppb级。

测定方法有标准曲线法、标准加入法。

①分析方法的选择:应针对测定元素的种类和特性进行分析,一般中药重金属及有害元素的测定中铅、镉采用石墨炉原子吸收法;砷和汞采用氢化物原子吸收法(汞一般用冷原子吸收法);铜采用火焰原子吸收法。

②分析条件的选择:

测定前应进行对仪器进行灵敏度和基质干扰等因素进行优化,达到要求后方可进行测定。

分析线:原子吸收法中常选择待测元素的共振作分析线,但并不是任何情况下都应使用共振线,例如As、Se、Hg的共振线在远紫外区,该区域火焰吸收强烈,不宜选用共振线作分析线。在选择分析线时,一般选用不受干扰且吸收最强的谱线作为分析线。

狭缝宽度的选择:选择不引起吸光度减小的最大狭缝宽度,就是最适宜的狭缝宽度。

原子化条件的选择:对于火焰原子化法,火焰的种类和燃助比的选择是很重要的。当燃气和助燃气选择好后,可通过下述方法选择燃助比:固定助燃气流量,改变燃气流量,测量标准溶液在不同燃助比时的吸光度,绘制吸光度-燃助比关系曲线,以确定最佳燃助比;对于石墨炉原子化器的使用。应注意干燥是一个低温去溶剂的过程,可在稍低于溶剂沸点的温度下进行。灰化是为了破坏和去除试样基体,可根据样品实际添加基改剂,在保证试样无明显损失的前提下,将试样加热到尽可能高的温度。原子化阶段应选择最大吸收信号的最低温度。总之,根据试样的性质确定各阶段所选定的温度与加热时间。

③选择合适的定量方法,一般采用标准曲线法,并考察工作曲线的线性浓度范围,相关系数不得小于0.995。但如果基体效应较强,无合适基体匹配时可考虑标准加入法,其优点是能够更好地消除样品中其它成分对测定的影响。

④一般原子吸收每份样品测定时至少读数2次或以上,并比较几次读数结果,若有偏离太大(正常测定浓度范围内RSD >30%)应重新测定或检查仪器及工作条件是否适当。

⑤实验用器皿以免被污染,均应事先洗干净并用10%硝酸浸泡过夜后再用去离子水冲洗干净备用。

⑥实验用试剂应选择优级纯或更纯级别,水为去离子水(电阻率应大于18MΩ)。可将洗净的器皿、试剂在仪器给定条件测试元素本底,满足要求后方可使用。

⑦供试品溶液的制备方法取样量、消化试剂、消化方法(推荐使用微波消解方法,该方法不易污染,样品消解过程元素不易损失,亦可采用干法消解或湿法消解,但应对消解方法和温度进行方法考察)等。上机溶液应澄清,酸度一般不大于10%。供试品溶液中元素的浓度应在工作曲线的浓度范围之内,否则应调整取样量或稀释倍数,并同法制备空白溶液作为试样空白。

5.含量测定结果的精密度要求

试验结果的精密度要求如下:

(1)容量法,两份测定结果的相对平均偏差不得大于2%;

(2)重量法,两份测定结果的相对平均偏差不得大于3%;

(3)氮测定法,两份测定结果的相对平均偏差不得大于3%;

(4)紫外-可见分光光度法,对照品比较法,两份测定结果的相对平均偏差不得大于2%;比色法不得大于3%;

(5)薄层色谱扫描法,两份测定结果的相对平均偏差不得大于5%;

(6)高效液相色谱法,两份测定结果的相对平均偏差不得大于2%;采用蒸发光散射检测器测定时相对平均偏差不得大于5%;

(7)气相色谱法,两份测定结果的相对平均偏差不得大于2%。

(8)电感耦合等离子体质谱法,两份测定结果的相对平均偏差不得大于20%,检测限附近可放宽至50%或以上。

(9)原子吸收分光光度法,两份测定结果的相对平均偏差一般不得大于20%,检测限附近可放宽至50%或以上。

6.方法验证

新增修的检测方法应按现行版《中国药典》四部通则9101收载的“药品质量标准分析方法验证指导原则”的要求进行方法学验证。验证的全部数据与照片及图谱应附在质量标准起草说明中(注:已进行研究但未列入标准的项目也应附有研究资料及照片和图谱)。

含量测定验证方法按《中国药典》四部通则9101“药品质量标准分析方法验证指导原则”执行。验证内容有准确度(即回收率试验)、精密度、专属性 、线性、范围、耐用性等。

含量测定验证结果要求如下:

(1)准确度实验,具体要求视样品含量范围不同而定。

待测定成分含量

回收率限度(%)

100%

98~101

10%

95~102

1%

92~105

0.1%

90~108

0.01%

85~110

10μg/g(ppm)

80~115

1μg/g

75~120

10μg/Kg(ppb)

70~125

 

(2)重复性实验  具体要求视样品含量范围不同而定。

待测定成分含量

重复性(RSD%)

100%

1

10%

1.5

1%

2

0.1%

3

0.01%

4

10μg/g(ppm)

6

1μg/g

8

10μg/Kg(ppb)

15

 

7.含量限(幅)度的制定

含量限(幅)度的制定,应根据药材、饮片的实际情况来制定。一般应根据不低于10批样品的测定数据,按其平均值的±20%作为限度的制定幅度,以干燥品来计算含量;毒性药材、饮片要制定限度范围,根据毒理学研究结果及中医临床常用剂量,确定合理的上下限数值。

含量限度规定的方式,有以下几种:

(1)所测定成分为有效成分时可只规定下限。所测定成分为有毒成分时可作限量检查,只规定上限。

(2)所测定成分为有毒成分同时又为有效成分时必须规定幅度。如马钱子:“本品按干燥品计算,含士的宁(C21H22N2O2)应为1.20%~2.20%”。

(3)凡含有两种以上的有效成分,而且该类成分属于相互转化的,可规定二种成分之和,如苦参:“本品按干燥品计算,含苦参碱(C15H24N2O)和氧化苦参碱(C15H24N2O2)的总量,不得少于1.2%”。

(4)多植物来源的药材、饮片,如外形能区分开而其含量差异又较大者,可制订两个指标,如昆布:“本品按干燥品计算,海带含碘(I)不得少于0.35%;昆布含碘(I)不得少于0.20%”。

 

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